PCR անալիզատորների լուծում. Հաճախակի տրվող հարցեր եւ լուծումներ

Polymerase Chain Reaction (PCR) վերլուծիչները մոլեկուլային կենսաբանության հիմնական գործիքներն են, որոնք հետազոտողներին թույլ են տալիս ուժեղացնել ԴՆԹ-ն `գենետիկ հետազոտություններից մինչեւ կլինիկական հետազոտություններ սկսած դիմումների համար: Այնուամենայնիվ, ցանկացած բարդ սարք, PCR- ի անալիզատորը կարող է հանդիպել խնդիրների վրա, որոնք ազդում են դրա կատարման վրա: Այս հոդվածը վերաբերում է որոշ ընդհանուր հարցերիPCR անալիզատորԱնսարքությունների լուծում եւ գործնական լուծումներ է տալիս ընդհանուր խնդիրների համար:

1. Ինչու է իմ pcr արձագանքը ուժեղացնում:

Օգտագործողների առջեւ ծառացած ամենատարածված խնդիրներից մեկը PCR- ի արձագանքի անկարողությունն է `թիրախային ԴՆԹ-ն ուժեղացնելու համար: Դա կարող է վերագրվել մի քանի գործոնների.

Սխալ այբբենային ձեւավորում. Համոզվեք, որ ձեր նախապատկերները հատուկ են թիրախային հաջորդականության համար եւ ունեն հալման օպտիմալ ջերմաստիճան (TM): Օգտագործեք ծրագրային գործիքներ `նախնական դիզայնի համար` առանցքային պարտադիրներից խուսափելու համար:

Անբավարար ձեւանմուշ ԴՆԹ. Ստուգեք, որ դուք օգտագործում եք բավարար քանակությամբ ձեւանմուշ ԴՆԹ: Շատ քիչ բան կհանգեցնի թույլ կամ ոչ մի ուժեղացման:

Նմուշի խանգարողներ. Նմուշի աղտոտող նյութերը կարող են խանգարել PCR- ի արձագանքը: Մտածեք ձեր ԴՆԹ-ն մաքրելը կամ արդյունահանման այլ մեթոդ օգտագործելով:

Լուծում. Ստուգեք ձեր այգու դիզայնը, բարձրացրեք կաղապարի կենտրոնացումը եւ համոզվեք, որ ձեր նմուշը չի պարունակում խանգարողներ:

2: Ինչու է իմ pcr արտադրանքը սխալ չափը:

Եթե ​​ձեր PCR արտադրանքի չափը այնքան էլ սպասելի չէ, այն կարող է ցույց տալ, որ խնդիրներ կամ օգտագործված բաղադրիչների հետ կապված խնդիր:

Ոչ հատուկ ուժեղացում. Սա կարող է առաջանալ, եթե պրիմը կապում է աննկատ կայքի: Ստուգեք նախապատկերների առանձնահատկությունը `օգտագործելով գործիք, ինչպիսին է պայթյունը:

Սխալ օծանելիքային ջերմաստիճանը. Եթե օծանելիքային ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է, ոչ հատուկ պարտադիր կարող է հանգեցնել: Գրադիենտ PCR- ի կողմից օծանելիքի ջերմաստիճանի օպտիմիզացում:

Լուծում. Հաստատեք այբբենարանի առանձնահատկությունը եւ օպտիմալացրեք ջրանցքի ջերմաստիճանը `PCR արտադրանքների ճշգրտությունը բարելավելու համար:

3. Իմ PCR անալիզատորը ցուցադրում է սխալի հաղորդագրություն: Ինչ պետք է անեմ:

PCR- ի անալիզատորի սխալի հաղորդագրությունները կարող են անհանգստանալ, բայց դրանք հաճախ կարող են ցուցմունքներ տրամադրել հնարավոր խնդիրների:

Կալիբրացման խնդիրներ. Համոզվեք, որ PCR անալիզատորը ճիշտ տրամաչափված է: Պարբերաբար պահպանման եւ տրամաչափման ստուգումները կարեւոր են ճշգրիտ արդյունքներ ստանալու համար:

Ծրագրային ապահովման խումբ. Երբեմն ծրագրային ապահովման սխալները կարող են խնդիրներ առաջացնել: Վերագործարկեք ձեր համակարգիչը եւ ստուգեք ծրագրաշարի թարմացումները:

Լուծում. Հատուկ սխալի կոդի համար դիմեք օգտագործողի ձեռնարկին եւ հետեւեք առաջարկվող խնդիրների լուծման քայլերին: Պարբերաբար սպասարկումը կարող է կանխել բազմաթիվ խնդիրներ:

4. Ինչու են իմ PCR- ի արձագանքի արդյունքները անհամապատասխան:

PCR- ի անհամապատասխան արդյունքները կարող են հիասթափեցնել մի քանի պատճառներով.

Ռեակտիվ որակի. Ապահովեք, որ բոլոր ռեակտիվները, ներառյալ ֆերմենտները, բուֆերները եւ DNTP- ները թարմ եւ բարձրորակ են: Ժամկետանց կամ աղտոտված ռեակտիվները կարող են առաջացնել փոփոխականություն:

Ther երմային ցիկլերի տրամաչափում. Temperature երմաստիճանի անհամապատասխանության պարամետրերը կարող են ազդել PCR գործընթացի վրա: Պարբերաբար ստուգեք ջերմային ցիկլերի տրամաչափումը:

Լուծում. Օգտագործեք բարձրորակ ռեակտիվներ եւ պարբերաբար ստուգեք ձեր ջերմային հեծանվորդը `հետեւողական արդյունքների ապահովման համար:

5. Ինչպես բարելավել PCR ռեակցիայի արդյունավետությունը:

PCR- ի ռեակցիաների արդյունավետության բարելավումը կարող է հանգեցնել ավելի բարձր եկամտաբերության եւ ավելի հուսալի արդյունքների:

Օպտիմիզացնել ռեակցիայի պայմանները. Փորձեք օգտագործել նախաներկային տարբեր կոնցենտրացիաներ, ձեւանմուշ ԴՆԹ եւ MGCL2: PCR- ի յուրաքանչյուր արձագանք կարող է պահանջել յուրահատուկ պայմաններ օպտիմալ կատարման համար:

Օգտագործեք բարձր հավատարմության ֆերմենտներ. Եթե ճշգրտությունը կրիտիկական է, հաշվի առեք, որ օգտագործեք բարձր հավատարմության ԴՆԹ պոլիմերազ, ուժեղացման ընթացքում սխալները նվազագույնի հասցնելու համար:

Լուծում. Կատարեք օպտիմիզացման փորձ `ձեր հատուկ պայմանները գտնելու համար ձեր հատուկ PCR- ի կարգաբերման համար:

Ամփոփում

Անսարքությունների լուծումPCR անալիզատորԿարող է լինել սարսափելի առաջադրանք, բայց հասկանալով ընդհանուր խնդիրները, եւ դրանց լուծումները կարող են զգալիորեն բարելավել ձեր PCR փորձը: Այս ընդհանուր խնդիրները լուծելով, հետազոտողները կարող են բարելավել PCR արդյունքները եւ ապահովել մոլեկուլային կենսաբանության ծրագրերում հուսալի արդյունքներ: Ռեակտիվների կանոնավոր պահպանումը, ռեակտիվների ուշադիր ընտրությունը եւ արձագանքման պայմանների օպտիմալացումը PCR հաջող վերլուծության բանալիներ են: